The Sun (2016)

Computing (2010)

Times, Sunday Times (2017)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2015)

Ласло, Джон (доктор медицины) «Понимание рака» (1987)

Times, Sunday Times (2014)

Mumby, Keith The Allergy Handbook (1988)

Христианство сегодня (2000)

Times, Sunday Times (2013)

Показать еще …

The Sun (2013)

Маккензи, Джеймс Ф. и Пингер, Роберт Р. Введение в общественное здоровье (1995)

The Sun (2014)

Ласло, Джон (доктор медицины) Понимание рака (1987)

Tondeur, Keith Say Goodbye to Debt (1994)

Times, Sunday Times (2007)

Томпкинс, Джонатан Управление человеческими ресурсами в правительстве (1995)

Times, Sunday Times (2014)

Times, Sunday Times (2006)

Times, Sunday Times (2009)

Times, Sunday Times (2006)

Times, Sunday Times (2013)

Times, Sunday Times (2014)

Times, Sunday Times (2013)

Times, Sunday Times (2008)

Times, Sunday Times (2008)

Рэндольф, Терон Г. и Мосс, Ральф В. (соавтор) Альтернативный подход к аллергии (1990)

5 дешевых, но высококачественных штаммов марихуаны

Идеально для каждого кармана!

По последним данным Statista, средняя цена на высококачественную травку в США составляет 319,47 долларов за унцию. Марихуана «Mids» в среднем стоит около 266 долларов за унцию. Отправляйтесь в Миссисипи за самой дешевой травой среднего сорта; он стоит около 170 долларов за унцию.

www.statista.com

Как видите, цены невероятно разумны в большинстве штатов, где рекреационная марихуана разрешена. Жители Орегона, в частности, выживают, платя всего 210 долларов за унцию! Помните, мы говорим о ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННОЙ марихуане! Можно было бы ожидать более низких цен в штатах, где можно свободно покупать траву.

Тем не менее, в Иллинойсе, новом законном штате в сфере развлечений, цена в настоящее время чрезвычайно высока и составляет 353 доллара за унцию. Во многом это связано с отсутствием диспансеров.Поезжайте в округ Колумбия, и вас разобьют! При цене почти 600 долларов за унцию вам лучше отправиться в поездку за более дешевой травкой, хотя вы рискуете быть арестованным за транспортировку каннабиса через границы штата!

В целом, однако, проживание в штате, где марихуана разрешена законом, увеличивает ваши шансы найти недорогую травку, которая по-прежнему соответствует требованиям с точки зрения качества.

К сожалению, если вы живете в штате, где нет легального рынка развлечений или действующих законов о медицинской марихуане, вам придется попробовать себя на черном рынке.Мало того, что цены намного выше, вы также совершаете правонарушение штата или федерального правительства, которое может привести к серьезному тюремному заключению!

Ваш лучший выбор для дешевой легальной марихуаны — это медицинский диспансер каннабиса, где цены, как правило, ниже, чем где-либо еще. Покупки окупаются, потому что, если вы этого не сделаете, вы можете в конечном итоге заплатить 30 долларов за грамм, в то время как другой диспансер предлагает травку аналогичного качества всего за 8 долларов за грамм!

Естественно, покупка оптом снижает цену, и если вы живете в таком штате, как Колорадо, вам разрешено выращивать самостоятельно! Несмотря на репутацию Калифорнии как производителя марихуаны, этого штата следует избегать.В таких городах, как Сан-Франциско, Лос-Анджелес и Сан-Диего, каннабис является одним из самых дорогих в Америке.

Какие факторы влияют на цены на марихуану?

Чтобы найти качественную и недорогую траву, важно понимать факторы, которые в первую очередь определяют цены.

1 — Налогообложение

Как и в случае с алкоголем, налоги превращают марихуану из недорогого продукта в дорогой. Поскольку каждый штат имеет свой уровень налогов, важно провести исследование и выявить худших виновников.Например, в штате Вашингтон вы уплачиваете розничный налог в размере 37%, а в Орегоне ставка составляет примерно 17%.

К сожалению, эти налоги — верхушка айсберга. В большинстве штатов есть дополнительные сборы, которые увеличивают цену. Например, на Аляске производители должны платить дополнительно 50 долларов за унцию выращенной продукции. В то время как в Калифорнии «всего» налог с продаж составляет 15%, его перечень дополнительных услуг означает, что общая ставка лишь немного ниже, чем в штате Вашингтон, где общий налог составляет почти 50%!

2 — Местонахождение

Хотя налогообложение также влияет на этот фактор, основной проблемой при местонахождении является спрос и предложение.Поскольку в таких местах, как Сан-Франциско и Лос-Анджелес, существует значительный уровень спроса, цены будут выше, чем в районах с более низким спросом. Однако, если вы сообразительный охотник за скидками, вы можете найти несколько магазинов с огромным запасом марихуаны и нехваткой покупателей, что характерно для многих мест в Орегоне.

Также фактом является то, что количество мест, где продают марихуану в той или иной области, является важным фактором ценообразования. Если в большом городе всего несколько магазинов, цены вырастут.

3 — Качество

Хотя можно найти высококачественную марихуану по разумным ценам, вы не можете ожидать, что найдете первоклассную марихуану по очень выгодной цене. Штаммы, содержащие высокие уровни THC и CBD, не будут дешевыми, равно как и марихуана, известная своим фантастическим запахом или эстетикой.

С другой стороны, потратить свои кровно заработанные деньги на низкосортную травку — это , а не , независимо от того, используете ли вы ее в лечебных или развлекательных целях. Помните старую поговорку: «Купи дешево, заплати дважды.«Не тратьте деньги на мусор; ходите по магазинам и экономьте больше, чтобы получить наилучшие впечатления от марихуаны.

Другие факторы, влияющие на цену, включают политические вопросы, бюрократизм и даже экологические проблемы, такие как лесные пожары и засухи. Некоторые фермеры потеряли урожай за весь сезон из-за недавних пожаров в Калифорнии.

В любом случае, давайте посмотрим на пять отличных сортов марихуаны, которые никуда не денутся. Мы предоставим (приблизительную) среднюю цену за грамм для каждого штамма вместе с самыми дешевыми местоположениями.

5 дешевых, но эффективных штаммов марихуаны

1 — Blue Magoo — штамм марихуаны с запоминающимся названием

Средняя цена на этот сорт составляет немногим более 10 долларов, но вы можете купить его за несколько долларов в Юджине, штат Орегон . Blue Magoo — это гибридный штамм, содержащий 16% ТГК. Это помесь штамма Blueberry, созданного DJ Short, и фенотипа William Wonder под названием F2.

Пользователи Blue Magoo обнаруживают, что он обладает успокаивающим действием в сочетании с церебральным кайфом.Хотя это якобы гибрид, этот сорт считается более индичным, поэтому удивительно, что он так быстро поражает вас. Несмотря на успокаивающий эффект, Blue Magoo обеспечивает легкую умственную стимуляцию, прежде чем, наконец, поможет вам заснуть.

2 — Северное сияние — любимый сорт марихуаны Западного побережья

При средней цене менее 8 долларов за грамм трудно ошибиться с Северным сиянием. Вы можете купить его всего за 4 доллара за грамм в Юджине, штат Орегон, который является одним из лучших мест в Америке, где можно купить высококачественную травку по бросовым ценам.Этот сорт является гибридом тайской сативы и афганской индики.

Northern Lights также оказался одним из самых известных сортов, поскольку курильщики любят высокое содержание ТГК (21%) в этой индика. Поскольку он настолько мощный, достаточно пары ударов, чтобы почувствовать эффект. Все начинается с ощущения эйфории и расслабления, и это идеальный штамм для лечения бессонницы и депрессии.

3 — Бубба Куш — Сладкий штамм марихуаны

Бубба Куш стоит в среднем около 10 долларов за грамм, но вы можете купить его за 7 долларов в Портленде, штат Орегон.Этот штамм с высоким содержанием индики чрезвычайно высок в ТГК (до 27%), и, поскольку он на 100% состоит из индики, вы можете ожидать, что диван станет вашим лучшим другом вскоре после его курения! Бубба Куш, созданный в 1996 году, представляет собой гибрид афгани, или северного сияния, и О.Г. Куша.

Одна вещь, которую вы заметите в Bubba Kush, — это характерный сладкий вкус, который вам нравится, когда вы его курите. После этого он довольно быстро поражает вас, и вы должны чувствовать себя полностью расслабленным. Это , а не для дневного использования, но если вам нужен хороший ночной сон, Bubba Kush — это ответ.

4 — Pennywise — Штамм каннабиса, который отвечает всем требованиям

Как следует из названия, если вы планируете разумно распорядиться своими копейками, вы можете подумать о покупке сорта каннабиса Pennywise. Этот вариант имеет невероятно высокое содержание CBD и определенно является индикатором сильного воздействия. Генетический состав Pennywise уникален, он содержит соотношение 1: 1 CBD и THC, что означает, что он подходит для ряда различных потребителей каннабиса при различных заболеваниях.

Вы заметите интригующее сочетание нот кофе и перца, за которым следует аромат, полный жевательной резинки и лимона.Кайф от Пеннивайза вызывает довольно эйфорию, но при этом сохраняет разум ясным и открытым.

5 — Белая вдова — основной штамм марихуаны в кофейнях Амстердама

Если вы когда-нибудь были в Амстердаме в 1990-х годах, вы, вероятно, курили White Widow, поскольку она была любимой кофейней. За прошедшие десятилетия его популярность не уменьшилась, поэтому удивительно, что он доступен в среднем по 10–12 долларов за грамм. Опять же, в Юджине вы найдете его всего за 4–5 долларов за грамм.Белая вдова — это гибрид южно-индийской индики с южноамериканской сативой.

Это гибрид с преобладанием сативы (60%), который содержит до 25% THC вместе с небольшими количествами CBD и CBN. Если вы ищете сорт марихуаны, который поможет вам расслабиться и расслабиться, White Widow — идеальный выбор. Только будьте осторожны, если вы новичок, потому что сладкий сладкий дым, производимый этим штаммом, может вызвать приступы кашля у тех, кто не привык к опыту.

Последние мысли о высококачественных недорогих сортах марихуаны

С ростом отрасли больше не бывает «хороших сортов марихуаны».«Вы можете найти десятки исключительных сортов по цене 10-15 долларов за грамм, и, что самое главное, предлагается так много сортов, что вы можете найти те, которые удовлетворят вашим конкретным потребностям.

Статья Источники

Cjx1bD4KPGxpPjxzcGFuIHN0eWxlPSJ0ZXh0LWRlY29yYXRpb246IHVuZGVybGluZTsiPjxhIGhyZWY9Imh0dHBzOi8vd3d3LnByaWNlb2Z3ZWVkLmNvbS9kaXJlY3RvcnkiIHRhcmdldD0iX2JsYW5rIiByZWw9Im5vZm9sbG93IG5vb3BlbmVyIG5vcmVmZXJyZXIiPmh0dHA6Ly93d3cucHJpY2VvZndlZWQuY29tL2RpcmVjdG9yeTwvYT48L3NwYW4 + PC9saT4KPGxpPjxhIGhyZWY9Imh0dHBzOi8vd3d3Lndpa2lsZWFmLmNvbS8iIHRhcmdldD0iX2JsYW5rIiByZWw9Im5vZm9sbG93IG5vb3BlbmVyIG5vcmVmZXJyZXIiPjxzcGFuIHN0eWxlPSJ0ZXh0LWRlY29yYXRpb246IHVuZGVybGluZTsiPmh0dHBzOi8vd3d3Lndpa2lsZWFmLmNvbS88L3NwYW4 + PC9hPjwvbGk + CjxsaT48YSBocmVmPSJodHRwczovL21qY2hhcnRzLmNvbS9jaGFydHMvYWxsLWNpdGllcy9ibHVlLW1hZ29vLyIgdGFyZ2V0PSJfYmxhbmsiIHJlbD0ibm9mb2xsb3cgbm9vcGVuZXIgbm9yZWZlcnJlciI + PHNwYW4gc3R5bGU9InRleHQtZGVjb3JhdGlvbjogdW5kZXJsaW5lOyI + aHR0cHM6Ly9tamNoYXJ0cy5jb20vY2hhcnRzL2FsbC1jaXRpZXMvYmx1ZS1tYWdvby88L3NwYW4 + PC9hPjwvbGk + CjwvdWw + Cg ==

Опубликовано: Июнь 20, 2019

Фактическая разница между дорогой и доступной по уходу за кожей, Accordin g экспертам

Если вы подписаны на блоггеров о красоте или пользователей YouTube, то, вероятно, вы израсходовали достаточно материалов по уходу за кожей, чтобы их хватило на всю жизнь.Вы, наверное, слышали и много о дорогих товарах и недорогих подделках для этих товаров. Некоторые любители красоты говорят, что дорогие варианты не зря стоят дорого, а другие полагаются на доступные по цене аптеки. Навигация может сбивать с толку, особенно если вы пытаетесь сбалансировать эффективность продукта с ограниченным бюджетом. Возьмем, к примеру, увлажняющие кремы — они являются одними из наиболее часто используемых продуктов по уходу за кожей, но их цена может варьироваться от менее 20 долларов до трехзначных (и даже выше, если вы хотите по-настоящему разозлиться).

Интересно, в чем разница между дешевыми и дорогими увлажняющими кремами и , я поговорил с экспертами о том, что разделяет их на разные категории. Если вы когда-нибудь ходили по проходам в Sephora, пытаясь понять, стоит ли покупать дорогой лосьон для лица, то вот ваш ответ.

Маркетинг и упаковка

Однако, как объясняет доктор Шарлотта Бирнбаум из дерматологии Spring Street в Нью-Йорке, не всегда самые дорогие продукты являются наиболее эффективными с научной точки зрения, даже если они содержат «более редкие» ингредиенты.

«Разница между доступным увлажняющим кремом и дорогим увлажняющим кремом может заключаться в нескольких вещах: маркетинг, упаковка и, возможно, патентованные ингредиенты», — говорит д-р Бирнбаум. «В общем, дорого не всегда значит лучше. Эти запатентованные ингредиенты могут быть дороже, поскольку они редки, но это не значит, что они более эффективны. Часто нам не дают научных доказательств того, что эти ингредиенты действительно того стоят ».

Знаменитый косметолог Джошуа Росс из SkinLab согласен с тем, что маркетинг часто увеличивает цену продукта раньше, чем что-либо другое.К счастью, Росс также поделился тем, что некоторые бренды преодолевают маркетинговую BS, предлагая продукты с высоким содержанием активных ингредиентов напрямую потребителю.

«Например, новый бренд средств по уходу за кожей Ghost Democracy предлагает легкий ежедневный увлажняющий крем без силикона, содержащий 12% пробиотиков, 1% ниацинамида и экстракт семян овса всего за 28 долларов», — предполагает Росс.

Концентрация

По словам доктора Дебры Джалиман, дерматолога из Нью-Йорка, сертифицированного советом директоров, главное, что влияет на цену увлажняющего крема, — это концентрация определенных ингредиентов в формуле.«Дорогой увлажняющий крем обычно имеет более высокую концентрацию« хороших »ингредиентов», — говорит доктор Джалиман. «Обычно они безопаснее для всех типов кожи. Часто они не содержат ароматизаторов, которые могут вызвать у некоторых аллергическую реакцию ».

Чтобы проиллюстрировать разницу между активными ингредиентами, лицензированный специалист по эстетике и эстетический менеджер SkinSpirit Карен Фернандес использовала аналогию замачивания чайного пакетика. «Подумайте о заваривании чайного пакетика, в котором первая чашка самая крепкая, но если вы продолжите использовать тот же чайный пакетик, он потеряет свою силу с каждой чашкой», — объясняет Фернанез.«Менее дорогие увлажняющие кремы содержат менее активные ингредиенты, которые могут быть побочными продуктами или остатками».

Сила

Однако важно помнить, что существует множество доступных увлажняющих средств, которые будут иметь такие же эффективные активные ингредиенты, как и дорогие, — просто они не будут содержать почти или таких эффективных ингредиентов.

«Убедитесь, что лучшие ингредиенты находятся в верхней части списка ингредиентов продуктов», — говорит доктор Джалиман, перечисляя такие ингредиенты, как гиалуроновая кислота, керамиды, ретинол, ниацинамид и глицерин.«Я обычно нахожу, что пациенты, которые обращаются с высыпаниями прыщей, имеют в своем режиме как минимум один очень недорогой продукт. Это не значит, что все недорогие товары плохие ».

Итог

Все это говорит о том, что существует множество отличных недорогих продуктов, а также не очень дорогих. Вам просто нужно провести свое исследование. Посмотрите на список ингредиентов, сверьте его с обещанием чистоты красоты Byrdie и проведите тест на пластырь, чтобы убедиться, что ваша кожа не имеет плохой реакции.Кроме того, для вас может иметь больше смысла тратиться на сыворотки (которые проникают глубже и обладают большей эффективностью), чем на увлажняющий крем. Независимо от того, решите ли вы пойти в аптеку или купить роскошный крем для лица, доктор Бирнбаум говорит, что самое важное в конце дня — это то, что вы действительно используете его регулярно.

«В конечном счете, лучший увлажняющий крем — это тот, который вы будете использовать», — говорит доктор Бирнбаум. «Если более изысканный,« более элегантный »увлажняющий крем лучше ощущается на вашей коже, и это значит, что вы будете его использовать — непременно.Но поймите: увлажняющие кремы не должны приносить прибыль. Дерматолог не сможет сказать, используете ли вы дорогой увлажняющий крем по сравнению с доступным по цене, но он может сказать, используете ли вы увлажняющий крем … вообще ».

Определение потенции Merriam-Webster

c : способность или способность достигать или добиваться определенного результата

Выбор подходящих аналитических инструментов для определения эффективности и биологической активности антибиотиков и устойчивости к антибиотикам

J Pharm Anal.2016 Aug; 6 (4): 207–213.

Отдел микробиологии, Комиссия по фармакопее Индии, Газиабад 201001, Индия

Поступила в редакцию 23 июля 2015 г .; Пересмотрено 29 февраля 2016 г .; Принята к печати 23 мая 2016 г.

Это статья в открытом доступе под лицензией CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Реферат

Антибиотики — это химиотерапевтические агенты, убивающие или подавляющие патогенные микроорганизмы.Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам — растущая проблема во всем мире из-за неизбирательного и нерационального использования антибиотиков. Чтобы преодолеть проблему резистентности и безопасно использовать антибиотики, важно правильно измерить эффективность и биоактивность антибиотиков. Микробиологический анализ и метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) используются для количественной оценки эффективности антибиотиков. Метод ВЭЖХ обычно используется для количественной оценки эффективности антибиотиков, но не может определить биоактивность; тогда как микробиологический анализ оценивает как эффективность, так и биологическую активность антибиотиков.Кроме того, биоанализ используется для оценки эффективной дозы против устойчивых к антибиотикам микробов.

Одновременно микробиологический анализ рассматривает несколько параметров, таких как минимальная ингибирующая концентрация (MIC), минимальная бактерицидная концентрация (MBC), концентрация предотвращения мутаций (MPC) и критическая концентрация (Ccr), которые используются для более информативного описания эффективности. . Микробиологический анализ — это простой, чувствительный, точный и экономичный метод, который дает воспроизводимые результаты, аналогичные ВЭЖХ.Однако ВЭЖХ не может полностью заменить микробиологический анализ, и оба метода имеют собственное значение для получения более реалистичных и точных результатов.

Ключевые слова: Эффективность, антибиотики, устойчивость к антибиотикам, микробиологический анализ, биоактивность, ВЭЖХ

1. Введение

Антибиотики — это химиотерапевтические агенты, которые убивают или подавляют рост микроорганизмов. Эти химические агенты используются для лечения заболеваний путем уничтожения патогенных микроорганизмов или подавления их роста при достаточно низкой концентрации, чтобы избежать нежелательного повреждения хозяина.Антибиотики — это лекарственные препараты, содержащие некоторые химические вещества, вырабатываемые микроорганизмами и путем химического синтеза. Известно, что эти вещества в очень низких концентрациях полностью уничтожают или частично подавляют микроорганизмы [1], [2]. Антибиотики широко применяются при лечении бактериальных заболеваний [3].

Противомикробная химиотерапия играет решающую роль в борьбе с инфекционными заболеваниями, вызываемыми микроорганизмами, но устойчивые к антибиотикам микроорганизмы представляют собой растущую проблему общественного здравоохранения.Неправильное использование антибиотиков способствует увеличению и распространению устойчивости к антибиотикам и может привести к суперинфекции [4], [5]. Из-за растущих проблем с устойчивостью критически важно количественное определение фактической концентрации активного ингредиента в препарате антибиотика.

Эффективность антибиотиков зависит от многих факторов, таких как способ введения, локализация инфекции, наличие мешающих веществ, концентрация лекарственного средства в организме, природа возбудителя, наличие лекарственной аллергии и резистентность микроорганизма к лекарственному средству. [5].Эффективность антибиотиков описывается с точки зрения потенции, и точное измерение потенции имеет решающее значение в фармакологии для безопасного и правильного использования антибиотиков [6].

Антибиотики чаще всего считаются поддельными и фальсифицированными фармацевтическими продуктами [7]. Небольшая разница в концентрации активного ингредиента в препаратах антибиотиков может повлиять на фактическую эффективность. Следовательно, количественное определение активного фармацевтического ингредиента (API) в препарате антибиотика очень необходимо [4], [8].Количественное определение активного ингредиента имеет решающее значение для органов, регулирующих лекарственные препараты во всем мире [9]. Количественная оценка активного ингредиента в препаратах антибиотиков важна для получения такого же фармацевтического эквивалента дженериков по сравнению с инновационными продуктами.

Эффективность антибиотиков можно определить химическими и биологическими методами [4]. Эти методы включают микробиологические анализы, автоматизированные химические анализы (например, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)), иммунологические анализы (например,грамм. флуоресцентный поляризационный иммунный анализ, флуоресцентный иммуноанализ) и радиоиммуноанализ [10]. Однако методология анализа была изменена на хроматографические анализы для многих антибиотиков, поскольку они обеспечивают количественные измерения чистоты, а также количества и типов примесей в антибиотиках. Тем не менее, для ряда коммерчески важных антибиотиков по-прежнему требуется определение активности с помощью микробиологических анализов [11]. Измерение компонентов антибиотика обычно выполняется химическими методами, такими как ВЭЖХ и УФ-спектрофотометрия, но эти методы не могут обеспечить истинное указание биологической активности, что является основным ограничением этих методов.Однако микробиологический анализ может точно определить как эффективность, так и биологическую активность антибиотика. Кроме того, микробиологический анализ не требует специального оборудования или токсичных растворителей [12], [13]. Примеси и родственные вещества не влияют на результаты микробиологического анализа [14]. Он также точно определяет фактическую концентрацию активного ингредиента в препарате антибиотика, когда возникает проблема устойчивости к микробам. Микробиологический метод — наиболее удобный способ определения активности антибиотиков [15].

Снижение антимикробной активности также выявит незначительные изменения, не обнаруживаемые химическими методами [16], [17]. Микробиологический анализ — единственный стандартный метод оценки потери активности антибиотика [17]. Ингибирование роста микробов в стандартных условиях можно использовать для демонстрации терапевтической эффективности антибиотиков. Однако для микробиологического анализа требуется эффективный и полностью охарактеризованный штамм микробов. Идентификация и характеристика микробного штамма выполняется культуральными и некультуральными методами [18], [19].

Определение противомикробной активности чрезвычайно важно для контроля качества и обеспечения качества препаратов антибиотиков. Следовательно, необходимо выбрать практичный и экономичный метод контроля качества антибиотиков [20], [21]. Недавно было разработано приложение микробиологического анализа для внутривенных антибиотиков. Этот метод очень приемлем для регулирующих органов для контроля активности антибиотиков [9]. Будучи биологическим анализом, микробиологический анализ подвержен некоторым биологическим ошибкам, но после проверки всех переменных параметров можно получить значимые результаты и достичь точности, аналогичной многим химическим методам [14].Микробиологический анализ по сравнению с химическими методами измеряет истинную реакцию антибиотиков на биологическую систему и используется для получения более реалистичного и точного измерения эффективности для преодоления проблемы устойчивости к антибиотикам [4].

2. Методы микробиологического анализа

Микробиологические анализы назначаются для лекарственных веществ и препаратов, активность которых не может быть адекватно определена химическими методами. Кроме того, устойчивость и чувствительность патогенных микроорганизмов также определяется микробиологическими анализами.Они проводятся ежедневно на бактериальных изолятах в клинических лабораториях и лабораториях контроля качества. Все методы микробиологического анализа включают либо диффузию противомикробного агента в агаре, либо разведение антибиотика в агаре или бульоне. Доступны различные варианты микробиологического анализа для оценки эффективности, биологической активности и устойчивости антибиотиков.

Диско-диффузионный метод Кирби-Бауэра используется для определения чувствительности или устойчивости патогенных аэробных и факультативных анаэробных бактерий к различным антимикробным соединениям.Патогенный микроорганизм выращивают на агаре Мюллера-Хинтона в присутствии различных фильтровальных бумажных дисков, пропитанных антимикробными препаратами. Отсутствие роста микробов вокруг дисков указывает на способность этого противомикробного соединения подавлять рост микроорганизмов [5]. Метод разбавления бульона включает воздействие на изолят ряда концентраций противомикробных агентов в среде бульона. При тестировании на микроразведение используется общий объем бульона примерно 0,05–0,1 мл, и его можно удобно проводить в планшете для микротитрования.При тестировании на макроразбавление используются объемы бульона около 1,0 мл в стандартных пробирках. Для обоих этих методов разбавления бульона самая низкая концентрация, при которой изолят полностью ингибируется, регистрируется как минимальная ингибирующая концентрация (МИК). В методе разбавления агара антимикробный агент включается в твердую агаровую среду в чашке Петри. Стандартная концентрация организмов засевается на поверхность этой среды. Отсутствие роста тестируемого организма после инкубации указывает на то, что он чувствителен при концентрации антимикробного препарата, введенной в среду [5].Метод разведения в агаре обеспечивает конкретную МИК противомикробного агента.

E-test (тест эпсилометра) — это количественный метод определения чувствительности к противомикробным препаратам. В Е-тесте тонкую инертную несущую полоску, содержащую противомикробный агент, наносят на засеянную пластину с агаром. После инкубации образуется асимметричный эллипс ингибирования. Пересечение края ингибирующей зоны и калиброванной несущей полоски указывает значение MIC в широком диапазоне концентраций (> 10 разведений) с присущей ему точностью и аккуратностью [22].

Метод диффузии в агаре (цилиндрическая пластина или чашечная пластина) является наиболее широко используемым методом оценки эффективности и биологической активности антибиотиков. Метод диффузии в агар зависит от диффузии антибиотика из вертикального цилиндра через затвердевший слой агара в чашке Петри. Рост конкретных микроорганизмов, инокулированных в агар, предотвращается в круглой области или зоне вокруг цилиндра, содержащего антибиотики [23], [24]. Принцип такого анализа состоит в том, чтобы сравнить, какая часть исследуемого образца дает такой же биологический эффект, как и в данном количестве стандартного препарата [17], [23], [24].Метод диффузии в агар связывает размер зоны ингибирования и дозу исследуемого антибиотика. Теоретически рассмотрена взаимосвязь диаметра ингибирующих зон и концентрации антибиотика в растворе, наносимом в чашках [1].

3. Различные дизайны тестов для анализа диффузии в агаре

Различные фармакопеи рекомендовали разные дизайны тестов диффузии в агаре. Планы анализа 2 × 2 и 3 × 3 приняты Индийской фармакопеей [23], Британской фармакопеей [24] и Бразильской фармакопеей [25].Схема анализа 5 × 1 принята Индийской фармакопеей [23] и Фармакопеей США [17], тогда как схема анализа 3 × 1 принята Европейской фармакопеей. Основополагающим требованием является использование адекватного экспериментального плана в отношении критериев линейности, точности и точности аналитических результатов. Настоятельно рекомендуется выбрать схему анализа, которая без дополнительных усилий дает лучшие результаты. Количество и характер образцов являются наиболее важными факторами, которые необходимо учитывать при выборе дизайна [21].

Схема анализа 2 × 2, также известная как симметричный и сбалансированный анализ, проста и эффективна, в ней используются две дозы стандарта и две дозы образца с одинаковой концентрацией. Каждая чашка Петри включает четыре дозы обоих препаратов альтернативным способом и таким образом, чтобы количество повторов было равно количеству чашек (A) [21]. В схеме анализа 3 × 3 используются три уровня доз каждого стандарта и образца, как показано на B. Для каждого образца, анализируемого с помощью схемы эксперимента 3 × 3, использовали шесть чашек [26].Анализ 5 × 1 включает пять препаратов стандарта и один препарат образца, который равен средней концентрации стандарта. В дизайне анализа 5 × 1 для каждого анализа использовали пять чашек Петри, чтобы проверить референсную концентрацию одновременно с каждым стандартом или концентрацией образца (C) [1], [27].

Планы анализов для биоанализа диффузией в агаре: (A) биоанализ 2 × 2; (B) 3 × 3 биотест; и (C) биоанализ 5 × 1. S: стандартные решения; Т: тестовые решения.

В схеме анализа 3 × 1 используются три препарата стандарта и один препарат образца, равный средней концентрации стандарта.Шесть чашек использовали для каждого образца, проанализированного с помощью экспериментальных дизайнов 3 × 1 [12].

Для разных целей рекомендуются разные конструкции, учитывая стоимость, ошибки и простоту анализа. Анализы 2 × 2 и 3 × 3 рекомендуются для исследований и разработок, поскольку они дают информацию о значимости регрессии и параллелизме между стандартной кривой и образцом, что позволяет оценить валидность теста. Доказано, что анализ 5 × 1 подходит для рутинного анализа в лабораториях контроля качества, где можно одновременно оценивать большое количество образцов.Анализ 3 × 1 подходит для рутинного анализа в лабораториях контроля качества, так как он упрощает выполнение теста и расчет активности, а также предлагает преимущества с точки зрения низкой стоимости и используемого материала. В соответствии с различными фармакопеями в

Таблица 1

Различные конструкции биоанализа для анализа диффузии в агаре.

2 × 2, 3 × 1 и 5 × 1 дизайны анализа сравнивались для гентамицин.Статистический анализ показал, что не было значительной разницы между результатами, полученными с помощью анализов 2 × 2, 3 × 1 и 5 × 1, и они были эквивалентными и взаимозаменяемыми [21].

4. Параметры, используемые для определения активности антибиотиков

Измерения активности с помощью микробиологических анализов более информативны по сравнению с ВЭЖХ и предоставляют достоверную информацию о биологической активности данного антибиотика. Для определения эффективности антибиотиков можно использовать несколько параметров in vitro, включая MIC, минимальную бактерицидную концентрацию (MBC), концентрацию предотвращения мутаций (MPC) и критическую концентрацию (Ccr).

МИК считается стандартным параметром для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным агентам. МИК можно определить как самую низкую концентрацию противомикробного агента, которая может подавлять видимый рост микроорганизмов после инкубации в течение ночи [29]. МИК используется в качестве инструмента исследования для определения активности новых противомикробных агентов in vitro, и на основе таких исследований можно получить важные данные для определения контрольных точек МИК [30]. МИК также используется в диагностических лабораториях для подтверждения необычной устойчивости [31], [32], для сравнения in vitro активности различных антимикробных агентов [33], [34], для оценки in vitro активности комбинаций антибиотиков против резистентных организмов [ 35] и дать рекомендации по дозировке антибиотиков [36].Значения МПК указывают на эффективность антибиотика и могут сравниваться только в пределах соответствующих классов антибиотиков. При сравнении антибиотиков с одинаковым молекулярным классом и методом эрадикации антибиотик с самым низким МИК является более эффективным, поскольку для уничтожения бактерий требуется меньше антибиотиков. Для расчета МИК использовалось несколько методов, таких как метод разбавления бульона [35], метод разбавления в агаре [37] и метод диффузии в агаре [38].

МБК признан стандартным количественным показателем бактерицидной активности противомикробных агентов.МБК определяется как самая низкая концентрация антимикробного агента, которая предотвращает рост микроорганизма после пересева в среду, не содержащую антибиотиков [39]. Значения МБК отражают концентрацию антибиотика, при которой происходит уничтожение бактериальных изолятов на 99,9%. МБК можно определить методами разбавления бульона в сочетании с методами на чашках с агаром. Бактерицидная активность антибиотика — важный параметр для эрадикации патогена; и чем мощнее противомикробный агент, тем менее вероятен устойчивый отбор [40].Значения MIC и MBC аналогичны для бактерицидных агентов, убивающих бактерии. Значения MBC предоставляют меньше информации при применении к бактериостатическим агентам, подавляющим рост бактерий, таким как макролиды.

ПДК — это концентрация антибиотика, которая не позволяет мутантам расти [41], или концентрация, выше которой бактериальным клеткам для роста требуется присутствие двух или более устойчивых мутантов [42]. ПДК — это новая концепция, применяемая для решения растущей проблемы устойчивости к антибиотикам за счет использования концентрации антибиотика, которая может предотвратить отбор устойчивых мутантов [43].Значения ПДК представляют концентрацию антибиотика, при которой происходит 100% эрадикация изолятов. MPC можно применять для расчета эффективности антибиотиков, для сравнения эффективности различных антибиотиков против одностадийных устойчивых мутантов и для сравнения частоты появления устойчивых мутантов [44]. Из-за растущей проблемы устойчивости к антибиотикам при многих инфекционных заболеваниях необходимо предотвратить дальнейший отбор устойчивых мутантов, чтобы можно было достичь такой концентрации антибиотика, при которой мутант не восстанавливается, даже если от 10 ¹⁰ до 10 ¹¹ клеток плакированы [45].Для технического удобства и сравнительных целей ПДК определяется как концентрация, при которой не наблюдалось восстановления колоний при нанесении ≥10 ¹⁰ клеток. ПДК можно определить с помощью того же метода разведения в агаре, который использовался для определения МИК, и для определения ПДК требуется больше (10 ¹⁰ ) клеток [43]. MPC использовался для изучения эффективности фторхинолонов в отношении клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis [42] и Streptococcus pneumonia [46].Тестирование MPC дает теоретический профиль антимикробных характеристик, но не доказало свою надежность в исследованиях на животных или клинических испытаниях. Существует окно концентрации антибиотика, в котором селективно амплифицируются устойчивые мутанты. Верхняя граница окна — это концентрация антибиотика, которая блокирует рост наименее восприимчивых, устойчивых мутантов первой стадии. Нижняя граница — это самая низкая концентрация антибиотика, которая блокирует рост большинства чувствительных к антибиотикам клеток.Поскольку верхний и нижний пределы окна поддаются измерению, можно сравнивать антибиотики, чтобы найти соединения с более узкими окнами, которые лучше всего подходят для введения выше верхней границы ().

Фармакодинамическое описание окна отбора мутантов.

Ccr — это минимальная концентрация антибиотика, которая подавляет рост микроорганизмов и предотвращает достижение критической точки концентрации бактерий [38]. Активность антибиотика может быть выражена с помощью Ccr, который является параметром чувствительности микроорганизма при определенных условиях анализа [39].Ccr может быть в два-четыре раза больше, чем MIC, которая определяется в разных условиях [47].

5. Факторы, влияющие на вариабельность и погрешность микробиологических анализов

Микробиологический анализ обеспечивает достоверную оценку активности антибиотиков с некоторой проблемой вмешательства со стороны биологически активных соединений или продуктов разложения [28]. Ученые изучают несколько факторов, которые обычно вызывают изменение диаметра зон при обычном диффузионном биотесте в агаре.Среди этих факторов наиболее важным фактором является неравномерное экспонирование отдельных пластин вверху или внизу стопки. Другой важной переменной является переменная во временном интервале между заливкой засеянного агара в чашки и временем нанесения раствора антибиотика на чашки [48].

Другие факторы, которые приводят к вариабельности и погрешности микробиологического анализа, включают толщину агара, концентрацию посевного материала, температуру инкубации, продолжительность воздействия и подготовку образца.Факторы, влияющие на скорость роста микробов, включают pH и химический состав среды, а также pH используемого буферного раствора. Наблюдалось влияние различных значений pH буфера на рост различных штаммов микробов [1], [4]. Толщина слоя агара сильно влияет на диаметр получаемой зоны. Чем выше толщина слоев агара, тем меньше диаметр зоны. Точно так же широко признано влияние концентрации посевного материала на размер результирующей зоны [1], [4], [14]. Были проведены эксперименты, чтобы определить, насколько критической может быть концентрация посевного материала, когда другие факторы постоянны [1], [4].Высокая концентрация инокулята тест-микроорганизма показывает мутный рост на чашке со средой и отсутствие антимикробной активности антибиотика, тогда как низкая концентрация инокулята показывает светлые и неизмеримые зоны.

Различия в температуре инкубации планшетов в разных положениях в стопках (т.е. сверху и снизу) неизбежны, но их можно минимизировать, поместив стопки в плотно прилегающие стальные цилиндры и избегая больших температурных сдвигов, особенно между комнатной температурой и температурой инкубатора.Химический состав среды можно фиксировать и оптимизировать, что способствует быстрому росту микроорганизмов. pH среды может быть изначально отрегулирован и поддержан добавлением соляной кислоты или гидроксида натрия в достаточных количествах. Поддержание pH среды является важным шагом, поскольку рост индикаторных микроорганизмов может привести к изменению pH среды. Было замечено, что прорастание спор Bacillus subtilis привело к повышению pH [49].

Экспериментальная изменчивость микробиологического анализа может быть минимизирована за счет улучшенного обращения, использования нескольких дисков или цилиндров на одной и той же чашке Петри для устранения дифференциальных эффектов роста, времени и температуры за счет уменьшения эффекта клина.Вариабельность микробиологических анализов также может быть минимизирована за счет включения внешних эталонных планшетов в местах, приправленных пряностями, и путем статистической проверки метода [9]. Подтвержденный биоанализ с диффузией в агаре может обеспечить высокий уровень воспроизводимости и точности.

6. Количественное определение антибиотиков методом ВЭЖХ

ВЭЖХ — это хроматографический метод, используемый для идентификации, количественного определения и очистки отдельных компонентов смеси в аналитической химии [50].ВЭЖХ широко используется в фармацевтической промышленности для количественного определения антибиотиков в фармацевтических препаратах. Он используется для предоставления информации о составе проб, связанных с наркотиками. Полученная информация может быть качественной, указывающей, какие соединения присутствуют в образце, или количественной, обеспечивающей фактическое количество соединений в образце [50]. ВЭЖХ используется на всех этапах создания нового лекарственного средства, а также регулярно используется при производстве лекарств.Он более привлекателен, чем классический биоанализ, с точки зрения скорости, точности и точности. Следовательно, он в значительной степени заменил микробиологические анализы для определения концентраций антибиотиков в биологических жидкостях и фармацевтических препаратах [9].

7. Сравнение микробиологического анализа и метода ВЭЖХ

При сравнении микробиологического анализа и химического анализа каждый показывает несколько преимуществ и недостатков [51]. Как микробиологические методы, так и методы ВЭЖХ используются для оценки эффективности антибиотиков [26], [27], а также для определения концентрации лекарственного средства в жидкостях организма [52] и для мониторинга терапевтических лекарственных средств [53].

Методы микробиологического анализа — один из наиболее широко применяемых методов определения активности антибиотиков. Однако, несмотря на некоторые преимущества метода ВЭЖХ, микробиологический анализ из-за его простоты, точности и дешевизны по-прежнему рекомендуется в качестве метода выбора при рутинном измерении активности, когда не требуются немедленные результаты и известны терапевтические режимы [51], [54] ], [55]. Проверенные химические методы также считаются специфическими и точными, но эти тесты, вероятно, будут очень узкими по своему применению и их гораздо сложнее установить, чем микробиологические тесты.Хотя автоматизированные химические методы более привлекательны, чем классический биоанализ с точки зрения скорости, точности и точности [56], и в значительной степени вытеснили микробиологические анализы для определения концентраций антибиотиков в жидкостях организма (сыворотке, плазме или моче) [9], [53] ], [57], эти методы имеют ограничения, когда возникает лекарственная устойчивость к определенному антибиотику.

Оценка эффективности противомикробного агента с помощью микробиологического анализа основана на его ингибирующем действии на микроорганизмы в подходящих условиях.Более того, в отличие от микробиологических анализов, химические анализы требуют дорогостоящего оборудования и отнимают много времени [58]. Подтвержденный биоанализ, который можно использовать точно и воспроизводимо, подходит как для исследований, так и для фармацевтической промышленности. Микробиологический анализ играет важную роль в производстве и контроле качества антибиотических препаратов [14], [59].

Однако автоматизированные анализы и биотесты часто используются и принимаются производителями дженериков как взаимозаменяемые и дополняющие другие методы [17], [60].Микробиологические и химические анализы сравнивались для измерения концентрации лекарственного средства в жидкости организма, и оба анализа работали одинаково хорошо с незначительной разницей в результатах [52]. Было обнаружено, что микробиологические анализы определяют более высокое содержание API по сравнению с ВЭЖХ [52], [56]. Сравнивались различные концентрации антибиотиков в жидкостях организма и эффективность различных антибиотиков in vitro с помощью обоих анализов, и была обнаружена сильная корреляция, которая отражала точность микробиологического анализа по сравнению с ВЭЖХ ().

Таблица 2

Корреляция между ВЭЖХ и биотестом диффузии в агаре.

Противомикробная активность разрушенного антибиотика, такого как фторхинолон, 64 может быть подтверждена с помощью микробиологического анализа [64]. ]. ВЭЖХ используется для определения активности антибиотиков, но это не фактическое измерение активности [59]. С другой стороны, микробиологический анализ с использованием живой системы дает более реалистичное измерение активности антибиотика.Снижение антимикробной активности из-за незначительных изменений в структуре антибиотика может быть обнаружено только с помощью микробиологического анализа. Более того, использование микробиологического анализа для измерения активности антибиотика более информативно, а также дает представление о профиле чувствительности патогенного организма к этому антибиотику [65].

Статьи показывают, что микробиологический анализ можно использовать с почти такой же точностью для определения эффективности антибиотиков с помощью ВЭЖХ. M.C. Хсу и П.В. Hsu [63] сравнил процентную эффективность амоксициллина в капсулах, инъекциях и гранулах с помощью микробиологического анализа и метода ВЭЖХ.Этими двумя методами не было получено значительной разницы в значениях анализа. Коэффициенты корреляции составили 0,996 для капсул, 0,997 для инъекций и 0,998 для лекарственных форм в виде гранул. Эффективность инъекции амоксициллина, полученная микробиологическим анализом и методом ВЭЖХ, показана на. Результаты показали сильную корреляцию между обоими методами [63]. Когда был построен график между эффективностью, оцененной обоими методами, была получена хорошая линейность (вставка).

Сравнение эффективности инъекции амоксициллина, определенной микробиологическим анализом и методом ВЭЖХ.Вставка: линейность микробиологического анализа и метода ВЭЖХ.

8. Заключение

Антибиотики — это разновидность противомикробных средств, используемых для лечения и профилактики бактериальных инфекций. Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам — одна из самых серьезных проблем во всем мире. Чтобы преодолеть проблему резистентности и безопасно использовать антибиотики, важно правильно измерить эффективность и биологическую активность антибиотиков. Обычно для измерения эффективности антибиотиков используются микробиологический анализ и метод ВЭЖХ, но все еще существуют разногласия относительно выбора подходящего метода среди исследователей и фармацевтических компаний.Литературные данные показывают, что и микробиологический анализ, и метод ВЭЖХ обладают рядом преимуществ и недостатков. Хотя метод ВЭЖХ является быстрым, точным и точным для количественной оценки эффективности антибиотиков, он не может определять биоактивность. Однако микробиологический анализ прост, чувствителен, точен, точен и рентабелен для оценки как эффективности, так и биоактивности. Помимо этого, микробиологический анализ становится наиболее важным методом для количественной оценки концентрации активного ингредиента, необходимой для подавления роста устойчивых к антибиотикам микроорганизмов.

Микробиологический анализ имеет некоторые биологические ошибки, но после проверки всех переменных параметров можно достичь точности, аналогичной методу ВЭЖХ. Утвержденный микробиологический анализ может дать значимые результаты и подходит для исследовательской и фармацевтической промышленности. Поскольку ВЭЖХ — это автоматизированный быстрый и точный метод оценки эффективности антибиотика, он используется для рутинных анализов в фармацевтической промышленности, где необходимо анализировать большое количество образцов в течение одного дня для выполнения требований здравоохранения.Оба метода следует использовать параллельно, чтобы получить более реалистичное и точное измерение активности антибиотиков.

Сноски

^☆ Экспертная проверка под ответственностью Сианьского университета Цзяотун.

Ссылки

12. T.J.A. Пинто, Ф. Лоуренко, Т.М. Канеко, Микробиологический анализ гентамицина с использованием альтернативного экспериментального дизайна, Ежегодное собрание и выставка AOAC, Анаис. Анахейн-Калифорния, 2007, стр. 157.

17.Фармакопея США, Фармакопейная конвенция США, Роквилл, Мэриленд, США, 2009 г., стр. 86–93.

23. Индийская фармакопея, Индийская фармакопейная комиссия, Газиабад, Индия, 2014 г., стр. 50–59.

24. Британская фармакопея, The Stationary Office, Лондон, 2015, стр. V396 − V402.

25. Farmacopeia Brasileira. Четвертое изд., Сан-Паулу, Атенеу, 1988, стр. 1. С. V.5.2.17 – V.5.2.17-15.

фактов о фентаниле

Фентанил — это синтетический опиоид, обычно используемый для лечения пациентов с хронической сильной болью или сильной болью после операции. Фентанил — это контролируемое вещество из Списка II, которое похоже на морфин, но примерно в 100 раз более сильнодействующее. Под наблюдением лицензированного медицинского работника фентанил имеет законное медицинское применение.Пациенты, которым прописан фентанил, должны находиться под наблюдением на предмет возможного неправильного использования или злоупотребления.

Незаконный фентанил, в основном производимый в подпольных лабораториях за рубежом и доставляемый контрабандой в Соединенные Штаты через Мексику, распространяется по всей стране и продается на нелегальном рынке наркотиков. Фентанил смешивают с другими запрещенными препаратами для повышения эффективности препарата, продают в виде порошков и назальных спреев и все чаще прессуют в таблетки, которые выглядят как законные опиоиды, отпускаемые по рецепту.Из-за отсутствия официального надзора или контроля качества эти поддельные таблетки часто содержат смертельные дозы фентанила, но не содержат обещанных лекарств.

Существует значительный риск того, что незаконные наркотики были намеренно загрязнены фентанилом. Из-за его эффективности и низкой стоимости торговцы наркотиками смешивают фентанил с другими наркотиками, включая героин, метамфетамин и кокаин, что увеличивает вероятность смертельного взаимодействия.

Производство незаконного фентанила не является точной наукой.Два миллиграмма фентанила могут быть смертельными в зависимости от размера тела человека, переносимости и предыдущего применения. Анализ DEA обнаружил поддельные таблетки с концентрацией от 0,02 до 5,1 миллиграмма (более чем в два раза превышающей смертельную дозу) фентанила на таблетку.

• 26% таблеток, испытанных на фентанил, содержали смертельную дозу.
• Организации по незаконному обороту наркотиков обычно распределяют фентанил килограммами. Один килограмм фентанила может убить 500 000 человек.

Кто-то может принять таблетку, даже не зная, что она содержит фентанил.Также можно принять таблетку, зная, что она содержит фентанил, но не имея возможности узнать, содержит ли она смертельную дозу.

По данным CDC, синтетические опиоиды (такие как фентанил) являются основным фактором увеличения смертности от передозировки в Соединенных Штатах, увеличившись на 38,4 процента за 12-месячный период, закончившийся в мае 2020 года. За этот период:

• 37 из 38 юрисдикций США, по которым имеются данные о синтетических опиоидах, сообщили об увеличении смертности от передозировки, связанной с синтетическими опиоидами.
• 18 из этих юрисдикций сообщили об увеличении более чем на 50 процентов.
• 10 западных штатов сообщили о более чем 98-процентном увеличении смертей, связанных с синтетическими опиоидами.

Предварительный подсчет смертей от передозировки наркотиков за двенадцать месяцев для всех наркотиков, синтетических опиоидов, кокаина и психостимуляторов для 50 штатов, округа Колумбия и города Нью-Йорк: 12 месяцев, заканчивающихся в июне 2019 г., до 12 месяцев, заканчивающихся в мае 2020 — https: // аварийная ситуация.cdc.gov/han/2020/han00438.asp

Если лекарство не выписано лицензированным медицинским работником и не отпускается в законной аптеке, вы не сможете узнать, поддельный он или законный. А без лабораторных исследований невозможно узнать количество фентанила в отдельной таблетке или какое количество могло быть добавлено к другому лекарству. Это особенно опасно из-за сильного действия фентанила.

исследователей создают недорогую вакцину против Covid-19

Новая вакцина против Covid-19, которая проходит клинические испытания в Бразилии, Мексике, Таиланде и Вьетнаме, может изменить то, как мир борется с пандемией.Вакцина, получившая название NDV-HXP-S, является первой в клинических испытаниях, в которой используется новый молекулярный дизайн, который, как ожидается, позволит создать более сильные антитела, чем вакцины нынешнего поколения. А новую вакцину сделать гораздо проще.

Существующие вакцины таких компаний, как Pfizer и Johnson & Johnson, должны производиться на специализированных заводах с использованием труднодоступных ингредиентов. Напротив, новую вакцину можно массово производить в куриных яйцах — тех же яйцах, из которых ежегодно производятся миллиарды вакцин против гриппа на заводах по всему миру.

Если NDV-HXP-S окажется безопасным и эффективным, производители вакцины от гриппа потенциально могут производить более миллиарда доз вакцины в год. Страны с низким и средним уровнем доходов, которые в настоящее время испытывают трудности с получением вакцин из более богатых стран, могут иметь возможность производить NDV-HXP-S для себя или приобретать его по низкой цене у соседей.

«Это потрясающе — это изменит правила игры», — сказала Андреа Тейлор, помощник директора Duke Global Health Innovation Center.

Однако сначала клинические испытания должны установить, что NDV-HXP-S действительно работает у людей.Первый этап клинических испытаний завершится в июле, а заключительный этап продлится еще несколько месяцев. Но эксперименты с вакцинированными животными вселили надежды на перспективу вакцины.

«Это отличный способ защиты», — сказал д-р Брюс Иннис из Центра инноваций и доступа к вакцинам PATH, который координировал разработку NDV-HXP-S. «Я думаю, что это вакцина мирового класса».

2P на помощь

Вакцины работают, знакомя иммунную систему с вирусом достаточно хорошо, чтобы вызвать защиту от него.Некоторые вакцины содержат целые убитые вирусы; другие содержат только один вирусный белок. Третьи содержат генетические инструкции, которые наши клетки могут использовать для производства вирусного белка.

После контакта с вирусом или его частью иммунная система может научиться вырабатывать антитела, которые атакуют его. Иммунные клетки также могут научиться распознавать инфицированные клетки и уничтожать их.

В случае коронавируса лучшей мишенью для иммунной системы является белок, покрывающий его поверхность, как корона.Белок, известный как шип, цепляется за клетки, а затем позволяет вирусу слиться с ними.

Но простая инъекция вируса коронавируса людям — не лучший способ их вакцинировать. Это потому, что шипованные белки иногда принимают неправильную форму и побуждают иммунную систему вырабатывать неправильные антитела.

Это понимание возникло задолго до пандемии Covid-19. В 2015 году появился еще один коронавирус, вызвавший смертельную форму пневмонии под названием MERS. Джейсон Маклеллан, структурный биолог из Медицинской школы Гейзеля в Дартмуте, и его коллеги решили создать вакцину против него.

Они хотели использовать спайковый белок в качестве мишени. Но им пришлось считаться с тем фактом, что шипованный белок меняет форму. Когда белок готовится к слиянию с клеткой, он принимает форму тюльпана, похожую на копье.

Ученые называют эти две формы префузионной и постфузионной формами шипа. Антитела против формы до слияния эффективно действуют против коронавируса, но антитела после слияния не останавливают его.

Доктор Маклеллан и его коллеги использовали стандартные методы для создания вакцины MERS, но в итоге получили множество постфузионных всплесков, бесполезных для их целей.Затем они открыли способ удерживать белок в форме тюльпана перед слиянием. Все, что им нужно было сделать, это заменить два из более чем 1000 строительных блоков в белке на соединение, называемое пролином.

Результирующий спайк, названный 2P, для двух содержащихся в нем новых молекул пролина, с гораздо большей вероятностью принял желаемую форму тюльпана. Исследователи ввели шипы 2P мышам и обнаружили, что животные могут легко бороться с инфекциями коронавируса MERS.

Команда подала патент на модифицированный шип, но мир почти не обратил внимания на изобретение.MERS, хотя и смертельно опасен, не очень заразен и оказался относительно незначительной угрозой; Менее 1000 человек умерли от MERS с тех пор, как он впервые появился у людей.

Но в конце 2019 года появился новый коронавирус SARS-CoV-2, который начал разорять мир. Доктор Маклеллан и его коллеги принялись за дело, разработав шип 2P, уникальный для SARS-CoV-2. В считанные дни Moderna использовала эту информацию для разработки вакцины против Covid-19; он содержал генетическую молекулу, называемую РНК, с инструкциями по созданию шипа 2P.

Вскоре их примеру последовали и другие компании, приняв 2P спайки для своих собственных разработок вакцин и начав клинические испытания. Все три вакцины, которые были разрешены до сих пор в США — от Johnson & Johnson, Moderna и Pfizer-BioNTech — используют спайк 2P.

Другие производители вакцин также используют его. Novavax добился хороших результатов с резким увеличением количества 2P в клинических испытаниях, и ожидается, что в ближайшие несколько недель он обратится в Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов за разрешением на применение в экстренных случаях.Санофи также тестирует спайк-вакцину 2P и планирует завершить клинические испытания в конце этого года.

Два пролина — хорошие; шесть лучше

Способность доктора Маклеллана находить спасительные ключи к разгадке структуры белков снискала ему глубокое восхищение в мире вакцин. «Этот парень гений», — сказал Гарри Клинтос, старший программный сотрудник Фонда Билла и Мелинды Гейтс. «Он должен гордиться тем огромным делом, которое он сделал для человечества».

Но как только доктор Маклеллан и его коллеги передали спайк 2P производителям вакцин, он снова обратился к белку для более детального изучения. Если замена всего двух пролинов улучшила вакцину, несомненно, дополнительные настройки могли бы улучшить ее еще больше.

«Было разумно попытаться получить лучшую вакцину», — сказал д-р Маклеллан, который сейчас является адъюнкт-профессором Техасского университета в Остине.

В марте он объединил усилия с двумя коллегами-биологами из Техасского университета, Ильей Финкельштейном и Дженнифер Мейнард.В их трех лабораториях было создано 100 новых шипов, в каждом из которых был изменен строительный блок. При финансовой поддержке Фонда Гейтса они протестировали каждую из них, а затем объединили многообещающие изменения в новые шипы. В конце концов, они создали единственный белок, который соответствовал их чаяниям.

Победитель содержал два пролина в спайке 2P плюс четыре дополнительных пролина, обнаруженных в другом месте белка. Доктор Маклеллан назвал новый спайк HexaPro в честь шести пролинов.

Структура HexaPro была даже более стабильной, чем 2P, как выяснила команда.Кроме того, он был эластичным, лучше противостоял воздействию тепла и вредных химикатов. Доктор Маклеллан надеялся, что его прочная конструкция сделает его эффективным средством в вакцине.

Доктор Маклеллан также надеялся, что вакцины на основе HexaPro достигнут большего числа людей в мире, особенно стран с низким и средним уровнем доходов, которые до сих пор получили лишь небольшую часть от общего количества вакцин первой волны.

«Доля вакцин, которые они получили до сих пор, ужасна, — сказал д-р Маклеллан.

С этой целью Техасский университет заключил лицензионное соглашение для HexaPro, которое позволяет компаниям и лабораториям в 80 странах с низким и средним уровнем дохода использовать белок в своих вакцинах без выплаты лицензионных отчислений.

Тем временем доктор Иннис и его коллеги из PATH искали способ увеличить производство вакцин против Covid-19. Они хотели вакцину, которую менее богатые страны могли бы сделать самостоятельно.

С небольшой помощью яиц

Первая волна санкционированных вакцин против Covid-19 требует специальных дорогостоящих ингредиентов. Например, вакцина Moderna на основе РНК нуждается в генетических строительных блоках, называемых нуклеотидами, а также в жирной кислоте, изготовленной на заказ, чтобы создать вокруг них пузырь.Эти ингредиенты должны быть собраны в вакцины на специально построенных заводах.

Способ производства противогриппозных вакцин — это исследование, напротив. Во многих странах есть огромные фабрики по производству дешевых прививок от гриппа, где вирусы гриппа вводят в куриные яйца. Яйца производят множество новых копий вирусов. Затем заводские рабочие извлекают вирусы, ослабляют или убивают их, а затем помещают в вакцины.

Команда PATH задалась вопросом, смогут ли ученые создать вакцину Covid-19, которую можно было бы дешево выращивать в куриных яйцах.Таким образом, те же фабрики, которые делают прививки от гриппа, смогут делать прививки от Covid-19.

Понимание требований к вакцинам и маскам в США

• • Правила о вакцинах . 23 августа Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов одобрило вакцину Pfizer-BioNTech от коронавируса для людей от 16 лет и старше, что открыло путь для увеличения полномочий как в государственном, так и в частном секторах. Частные компании все чаще вводят вакцины для сотрудников.Такие полномочия разрешены законом и были поддержаны в судебном порядке.
  • Правила маски . Центры по контролю и профилактике заболеваний в июле рекомендовали всем американцам, независимо от статуса вакцинации, носить маски в закрытых общественных местах в районах, где наблюдаются вспышки заболеваний, в отличие от рекомендаций, предложенных в мае. Посмотрите, где C.D.C. руководство будет применяться, и там, где государства ввели свою собственную политику масок. В некоторых штатах борьба за маски стала предметом споров, поскольку некоторые местные лидеры игнорируют государственные запреты.
  • Колледжи и университеты. Более 400 колледжей и университетов требуют вакцинации студентов от Covid-19. Почти все находятся в штатах, голосовавших за президента Байдена.
  • Школы . И Калифорния, и Нью-Йорк ввели обязательные вакцины для работников образования. Опрос, опубликованный в августе, показал, что многие американские родители детей школьного возраста выступают против обязательных прививок для учащихся, но больше поддерживают требования о масках для учеников, учителей и сотрудников, которым не делаются прививки.
  • Больницы и медицинские центры . Многие больницы и крупные системы здравоохранения требуют, чтобы сотрудники делали вакцину против Covid-19, ссылаясь на рост числа заболевших, вызванный вариантом Delta, и неизменно низкие показатели вакцинации в своих общинах, даже среди их рабочей силы.
  • Нью-Йорк . Доказательство вакцинации требуется от рабочих и клиентов для обедов в помещении, спортзалов, представлений и других ситуаций в помещениях, хотя принудительное применение не начинается до сентября.13. Учителя и другие работники образования в обширной школьной системе города должны будут получить хотя бы одну дозу вакцины к 27 сентября без возможности еженедельного тестирования. Работники городской больницы также должны пройти вакцинацию или проходить еженедельное тестирование. Аналогичные правила действуют для сотрудников штата Нью-Йорк.
  • На федеральном уровне. Пентагон объявил, что будет стремиться сделать прививки от коронавируса обязательными для 1,3 миллиона военнослужащих, находящихся на действительной военной службе страны, «не позднее» середины сентября.Президент Байден объявил, что все гражданские федеральные служащие должны будут пройти вакцинацию от коронавируса или пройти регулярное тестирование, социальное дистанцирование, требования к маскам и ограничения на большинство поездок.

В Нью-Йорке группа ученых из Медицинской школы Икана на горе Синай знала, как сделать именно такую ​​вакцину, используя птичий вирус под названием вирус болезни Ньюкасла, который безвреден для людей.

В течение многих лет ученые экспериментировали с вирусом болезни Ньюкасла, чтобы создать вакцины от ряда болезней.Например, чтобы разработать вакцину против Эболы, исследователи добавили ген Эбола к собственному набору генов вируса болезни Ньюкасла.

Затем ученые вставили созданный вирус в куриные яйца. Поскольку это птичий вирус, он быстро размножается в яйцах. В итоге исследователи получили вирусы болезни Ньюкасла, покрытые белками Эбола.

На горе Синай исследователи решили сделать то же самое, используя белки-шипы коронавируса вместо белков вируса Эбола. Когда они узнали о Dr.В новой версии HexaPro Маклеллана они добавили это к вирусам болезни Ньюкасла. Вирусы ощетинились белками-шипами, многие из которых имели желаемую форму до слияния. В знак уважения к вирусу болезни Ньюкасла и вирусу HexaPro они назвали его NDV-HXP-S.

PATH организовал производство тысяч доз NDV-HXP-S на вьетнамской фабрике, которая обычно производит вакцины против гриппа в куриных яйцах. В октябре фабрика отправила вакцины в Нью-Йорк для тестирования. Исследователи Mount Sinai обнаружили, что NDV-HXP-S обеспечивает мощную защиту мышей и хомяков.

«Я могу честно сказать, что могу защитить каждого хомяка, каждую мышь в мире от SARS-CoV-2», — сказал доктор Питер Палезе, руководитель исследования. «Но до сих пор не известно, что он делает с людьми».

Эффективность вакцины принесла дополнительную пользу: исследователям нужно было меньше вирусов для эффективной дозы. Одно яйцо может дать от пяти до 10 доз NDV-HXP-S по сравнению с одной или двумя дозами противогриппозных вакцин.

«Мы очень рады этому, потому что думаем, что это способ сделать дешевую вакцину», — сказал д-р.- сказал Палезе.

PATH затем соединил команду Mount Sinai с производителями вакцины против гриппа. 15 марта Вьетнамский институт вакцин и медицинских биологических препаратов объявил о начале клинических испытаний NDV-HXP-S. Неделю спустя этому примеру последовала правительственная фармацевтическая организация Таиланда. 26 марта Бразильский институт бутантана заявил, что запросит разрешение на начало собственных клинических испытаний NDV-HXP-S.

Между тем, команда Mount Sinai также предоставила лицензию на вакцину мексиканскому производителю вакцин Avi-Mex в качестве интраназального спрея.Компания начнет клинические испытания, чтобы увидеть, насколько эффективна вакцина в этой форме.

Для вовлеченных стран была привлекательной перспектива полностью самостоятельно производить вакцины. «Эта вакцина производится тайцами для жителей Таиланда», — сказал министр здравоохранения Таиланда Анутин Чарнвиракул в заявлении в Бангкоке.

В Бразилии Институт Бутантана провозгласил свою версию NDV-HXP-S «бразильской вакциной», которая будет «полностью производиться в Бразилии, вне зависимости от импорта.

Г-жа Тейлор из Duke Global Health Innovation Center выразила сочувствие. «Я могла понять, почему это действительно может быть такая привлекательная перспектива», — сказала она. «Они оказались во власти глобальных цепочек поставок».

Мадхави Сандер, эксперт по интеллектуальной собственности в Юридическом центре Джорджтаунского университета, предупредил, что NDV-HXP-S не будет немедленно помогать таким странам, как Бразилия, в борьбе с нынешней волной заражения Covid-19. «Мы не говорим о 16 миллиардах доз в 2020 году», — сказала она.

Вместо этого стратегия будет иметь важное значение для долгосрочного производства вакцины — не только против Covid-19, но и для других пандемий, которые могут возникнуть в будущем. «Это звучит очень многообещающе», — сказала она.

Тем временем доктор МакЛеллан вернулся к молекулярной чертежной доске, чтобы попытаться создать третью версию своего спайка, которая даже лучше, чем HexaPro.